|
Ідентифікація та визначення кількості клітин, які секретують цитокіни. Об'єктивний і швидкий аналіз (3:00) цитокін-продукуючих клітин. Чутливість методу - 1: 300 000
|
Переваги методу
- Виробка цитокінів визначається на рівні кожної окремої клітини, дозволяючи визначати частоту цитокин-продукуючих клітин.
- Метод ELISPOT більш чутливий, ніж ELISA.
здатний виявляти 1 цитокін-продукуючу клітину з 300000 клітин популяції.
- На відміну від методу ELISA за допомогою методу ELISPOT досліджуються живі клітини, а не біологічні рідини.
- Об'єктивний і швидкий аналіз кількості Циткін-продукуючих клітин (spots - точки) і відносної кількості цитокина на клітку (spot size - розмір крапки).
BD™ ELISPOT - широкий спектр тест-систем для кількісного визначення цитокінів в різних біологічних рідинах людини і тварин.
Три варіанти реагентів BD™ ELISPOT
- BD™ ELISPOT Kits - повністю готові до використання набори, що містять всі необхідні компоненти.
Склад наборів:
- 2 планшета ImmunoSpot® ELISPOT з нанесеними первинними антитілами
- Вторинні бiотинильованi антитiла
- Кон'югат стрептавідину-пероксидази
- AEC субстрат/Хромоген
- Розріджувач для зразків
- Буфер для промивання планшет
- Концентрат PBS
- BD ELISPOT Sets - ннабори, призначені для проведення досліджень великої кількості зразків. До складу наборів входять реагенти, яких достатньо для постановки реакції в десяти 96-планшетах.
Склад наборів:
- Первинні антитіла (Capture)
- Вторинні антитіла (Detection)
- Кон'югат стрептавідину-пероксидази
- BD ELISPOT Reagent Pairs (Пари антитіл) – антитіла, достатні для постановки реакції в десяти
Склад наборів:
- Первинні антитіла (Capture, формат NA/LE), для 5 планшет
- Вторинні бiотинильованi антитiла (Detection)
Методика постановки реакції (з використанням BD™ Elispot)
1. Первинні антитіла
Для форматів Sets і Pairs: покрити мікропланшети первинними антитілами до відповідного цитокіну.
Для наборів формату ELISPOT Kit: перейти до етапу 3.
|
|
2. Блокування
Блокувати незв'язані сайти за допомогою протеїну.
|
|
3. Додати клітини
Інкубувати клітини в лунках з антигеном, мітогеном і т.п.
|
|
4. Відмити
Видалити клітини.
|
|
5. Вторинні антитіла
Додати бiотинилювання вторинних анти-ЦИТОКІНОВИХ антитіл.
|
|
6. Фермент-авидин.
Додати стрептавідин-пероксидази.
|
|
7. Інкубувати з субстратом
Додати субстрат і контролювати формування забарвлених точок.
|
|
8. Аналізувати за допомогою світлового міроскопа
або спеціалізованого приладу Immunospot® Series I Analyzer
(CTL Analyzers LLC).
|
|
Назад у розділ
|